中壓層析柱是凝膠層析技術中的主體，一般用玻璃管或有機玻璃管。根據樣品混合物中各組分在固定相和流動相中分配系數不同，從而分離的一種層析法。它的直徑大小不影響分離度，樣品用量大，可加大柱的直徑，一般制備用凝膠柱，但在加樣時應將樣品均勻分布于柱床面上。此外，直徑加大，洗脫液體體積增大，樣品稀釋度大。分離度取決于柱高，為分離不同組分，柱床必須有適宜的高度，分離度與柱高的平方根相關。